Võib -olla soovite teadusprojekti jaoks valku denatureerida või olete lugenud denatureeritud toidu kohta ja soovite teada, kuidas see toimib. Denaturatsioon on protsess, mille käigus valk kaotab oma kuju ja struktuuri väliste jõudude, sealhulgas kuumuse, kiirguse, hapete ja lahustite mõjul. Orgaanilised lahustid denatureerivad tavaliselt valke. Valgu täpne denatureerimisviis sõltub konkreetsest, millega soovite töötada, kuna need kõik vajavad erinevatel tasanditel erinevaid denatureerivaid aineid. Enamikku valke saab denatureerida, kui teate, mida valgu keskkonnas muuta.
Sammud
Meetod 1: 2: valgu denatureerimine
Samm 1. Kasutage soojust
Kuumus on üks lihtsamaid ja levinumaid valgu denatureerimise viise. Kui kõnealune valk on toidus olemas, denatureerib see lihtsalt toiduvalmistamisel. Paljusid valke saab denatureerida, hoides neid temperatuuril 100 ° C või üle selle (212 ° F). See võimaldab valkudel hüübida ja vähendada nende lahustuvust.
Kokkupuute kestus sõltub sellest, mida te kuumusega kokku puutute. Näiteks võib muna küpsetada pannil keskmisel kuumusel viie minuti jooksul, samal ajal kui rösti küpsetamiseks võib kuluda tunde
Samm 2. Kandke alkoholi
Alkohol rikub vesiniksidemeid, mis tekivad peptiidsideme amiidrühmade vahel. Kui valk puutub kokku alkoholilahusega, moodustavad alkoholimolekulid valguahelaga uued sidemed. Kasutage 70% alkoholi lahust, et murda läbi bakterite rakusein ja denatureerida valk.
Kontsentreeritud alkoholid võivad olla ohtlikud, kuna need on tuleohtlikud ja mürgised. Kandke alati täielikku turvavarustust, sealhulgas kindaid ja silmade kaitset, ning käepidet turvalises, kontrollitud temperatuuriga keskkonnas
Samm 3. Muutke pH -d
Valgu sisemine struktuur võib laguneda, kui selle keskkond on väga happeline või väga leeliseline, kuna need katkestavad ioonsidemed, mis hoiavad koos valgu soolasildu. Lisage valgule happe või aluse lahus. Ümbritseva keskkonna pH peaks olema üle 10 või alla 4, et soodustada denatureerimist. Kui te muudate hapet, peaks pH olema vahemikus 2 kuni 5.
PH muutmine võib aminohapet ioniseerida, sõltuvalt selle aminohappe iga funktsionaalrühma pKa -st. Samuti saate ioniseerida aminohappes sisalduvat aminorühma või karboksüülrühma
Samm 4. Proovige raskmetallide sooli
Raskmetallid võivad katkestada valgu sidemed, põhjustades selle struktuuri kaotuse. Raskmetallide, näiteks elavhõbeda ja plii sooli võib kasutada erinevate valkude denatureerimiseks. Sellised soolad on saadaval enamiku kemikaalide tarnijatelt ning neid tuleb alati kasutada ettevaatlikult ja sobiva turvavarustusega, sealhulgas kindad ja silmakaitse.
Raskmetallid võivad interakteeruda valgu funktsionaalsete külgahela rühmadega, moodustades komplekse. Raskmetallid oksüdeerivad ka valgu aminohappe külgahelaid
Meetod 2/2: valkude renoveerimine
Samm 1. Tehke kindlaks, kas valk suudab uuesti voltida
Mõned denatureerimise vormid on püsivad, samas kui teisi saab tagasi võtta. Näiteks muna või liha küpsetamist ei saa tagasi võtta, kuid kõrge pH -ga kokkupuutunud valk võib neutraalsemasse keskkonda pannes oma kuju taastada.
Kas valk saab uuesti voltida või mitte, sõltub selle DNA -st. DNA hoiab teavet, mis on vajalik valgu algseisundisse naasmiseks
Samm 2. Eemaldage denatureeriv tegur
Taastage valgu ümbritsev keskkond seisma ja eemaldage denatureeriv element. Eemaldage näiteks hape või alus või viige valk tagasi mõistlikumale temperatuurile.
Samm 3. Kasutage renoveerimiskomplekti
Paljud laboritarvete ettevõtted müüvad renoveerimiskomplekte, mis võimaldavad teil skaneerida parimaid parameetreid, et soodustada renaturatsiooni. Sellised komplektid võivad olla eriti kasulikud, kui vaatate valke laboris või katsekeskkonnas.
Näpunäiteid
- Denatureeritud valk kaotab oma kvartaalse, tertsiaarse ja sekundaarse struktuuri, mis on nähtav tema emakeeles, kuid selle esmane struktuur jääb alles.
- Samuti kaotab denatureeritud valk osa oma bioaktiivsusest, mõnel juhul, nagu ensüümide puhul, kaotades oma töövõime. Näiteks ei pruugi substraadid enam olla võimelised siduma denatureeritud ensüümidega.
- Denatureeritud valk võib lahuses lahustuvuse kaotada.
- Samuti saate nukleiinhappeid denatureerida, kasutades ahelate eraldamiseks laboratoorseid meetodeid.
